去年做过一次Real-Time PCR(RT-PCR),最近又要做,却突然发现已经忘了怎么操作rotor-gene这个软件了,看来有时记录还是很重要的,尤其是做的次数少的实验,所以整理下操作步骤.下次简单记录下后期数据的分析处理.由于操作的是rotor-gene和SYBR Green I,所以底下以此为做法操作.
1.运行软件,选择SYBR Green(R) I (如果使用taqman探针,则选择dual labeled probe程序)
2.根据管子选择平头还是凸头管
3.选择fam/sybr,edit profile,hold处选择时间和温度,如94度8分钟
4.cycling处设置变性,退火,延伸温度和时间,可以直接用鼠标拉动边缘调节(如果使用taqman探针则用两步法,94度15秒,60度1min).循环数45-50
5.点击start run,选择保存位置,开始运行
6.可以看运行所需时间,xx minutes remaining,时间到自动结束,打开保存文件分析即可
