甲型H1N1病毒检测试剂盒分析解释

昨天中国宣布成功研制出猪感染甲型H1N1病毒检测试剂盒,由于我是学生物的,于是就好好看了一遍,不过由于主攻方向不是这方面,所以只是以自己所学来解释分析这个试剂盒.

试剂盒理论上应该分为以下几个部分:
1.组织RNA的提取(病毒的遗传物质是RNA,而不是DNA)
2.RNA的纯化
3.RNA的反转录(RT-PCR)
4.PCR鉴定

新闻中提到"适用于检测猪组织、分泌物和培养物的甲型H1N1病毒核酸，应用该方法可在5小时内获得检测结果"。我就大致解释下这方面的时间

1.由于是检测猪组织分泌物和培养物,所以首先可以利用trizol进行RNA的提取.具体方法类似于 利用Trizol提取植物组织RNA ,这一步骤视材料多少大约需要40分钟到60分钟
2.由于提取的组织RNA中含有DNA组分,为了避免对结果产生影响,一般需要进行DNA酶解去除步骤,如果量大,则需要氯化锂沉淀纯化.考虑到试剂盒是快速检测,一般可能只是进行DNA酶处理去除DNA,方法类似于promega试剂盒,此过程大约需要50分钟到60分钟
3.RNA的反转录(RT-PCR),即将RNA反转录成DNA,方法参考fermentasRT-PCR试剂盒,此过程大约需要80分钟到90分钟
4.最后就是将得到的DNA进行PCR扩增,利用琼脂胶查看是否有H1N1的特异性条带.根据检测片段的长度,此过程时间最长,基本需要2小时到3小时.

综合算来,如果顺利的话基本能在5小时得到结果.
大致解释下,如果有错,多多交流~~~