学会了real time PCR的基本方法

前2周由于老板提出对RT PCR(Reverse transcriptase-PCR)的质疑,因此要求进行real time PCR验证,我想正好学习一下新东西.以前看GMO组的real time花花绿绿的曲线,完全没有头绪,经过这次实战,总算基本了解了其中的一些含义,虽然还有很多不明白.实验主要使用SYBR Green I测量,这个是real time PCR最基础使用的试剂.第一次做的时候,居然模板只加了1ul,虽然最后的结果不弥散,不过还是不应该,模板量高才能减少误差,RT基本原理.后来进行的一次,增加了模板的量, 不过有2个样效果偏差比较大,据说机器最近有些孔有问题,打算等自己实验室的机器修好了再做一次,顺便把expression pattern也做一次看看.最近和张博讨论到我的结果,指出缺少actin对照....看来我还要接着再做几个,他指出最后老板肯定是要一个柱状图,这我倒是不会做,到时再请教了.还是学些新东西比较对我的脾气,我喜欢多学点东西,而不是每天做着同一样重复步骤,虽然操作熟练是必要的,但是我读博士可不是为了狭窄的那一点点实验技术.增加更多的见识,今后出来才能多多变

求知 · 2008-08-30 · 633 人浏览

使用leica TCS SP5观察荧光染色

前阵子由于原先使用的confocal显微镜挂了,一直没有地方观察微丝,好在后来联系了Leica的一个实验室,能让我们临时试用下.上周去进行观察,使用TCS SP5,很新的一个型号,使用下来效果也非常好,以前根前部生长区的细胞由于非常小,一直观察不清楚,没想到用SP5 63倍的物镜观察的非常清晰.无论是整体观察还是框出其中一个细胞进行说明,都很直观.应了一句话,"工欲善其事,必先利其器",但是可能老板没钱,要是能有这样一台机器就好了,毕竟跑去观察一周只能做一批材料,要是自己有,没准一天4批了.....据说新学期老板买了台普通荧光显微镜,价格是confocal的1/3,不过我觉得要是有钱还是直接 confocal好,毕竟最后文章中用的全是confocal的图,拍摄数据记录也详细,所谓一步到位嘛.回来后只要去下载LAS AF Lite进行照片的导出就行了,挺方便的,不需要在那直接存好tif回来处理,反而缺少很多信息.

求知 · 2008-08-26 · 804 人浏览
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