一二、前言及原则※
mRNA 疫苗是将外源目的基因序列经过转录等工艺制备的 mRNA,通过特定的递送系统导入机体细胞并表达目的蛋白、刺激机体产生特异性免疫应答，从而使机体获得免疫保护的一种核酸疫苗。
mRNA 疫苗具有以下特点：（1）能进入细胞，在体内表达相应的抗原蛋白；（2）能够刺激机体免疫系统产生体液免疫和/或细胞免疫应答，发挥相应的免疫预防和/或免疫治疗作用；（3）常用的递送系统同时还具有类似佐剂的部分特性，可增强免疫应答或改变免疫应答类型；（4）mRNA可通过细胞的正常代谢机制降解。
适用于预防人类感染性疾病的以脂质纳米颗粒（Lipid nanoparticle，LNP）为递送载体的mRNA疫苗，包括非复制和复制型mRNA疫苗。
一般情况下，非临床安全性研究应遵循《药物非临床研 究质量管理规范》。
三、非临床研究※
（一）受试物 ※
mRNA疫苗组成成分及结构的具体信息，包括LNP 的组成成分、结构及比例，靶抗原的基因序列和功能，以明确或提示 mRNA 疫苗的理化性质、作用原理及关键质量属性等信息。
（二）药理学※
体外活性 体外活性检测可采用体外转染哺乳动物细胞或无细胞 翻译系统（Cell-free translation），检测靶抗原表达，以 表明mRNA疫苗在体外能够表达目的蛋白。
免疫原性 应首先在不同动物体内检测特异性的体液和细胞免疫 应答，以验证 mRNA 疫苗的免疫原性。建议探索不同免疫途 径、免疫程序、免疫剂量下的免疫应答水平、特性及持久性。免疫原性研究可以为后续毒理试验设计（包括相关动物 种属选择、给药方案设计等）和临床试验方案的制订提供参 考和依据。
保护力试验（攻毒试验）一般应在动物体内进行保护力试验，以验证疫苗的保护作用。保护力试验中建议伴随免疫原性检测，以提示免疫应答与保护力的相关性。
（三）生物分布※
需对mRNA 疫苗开展生物分布研究。mRNA疫苗可能通过 血液或淋巴系统分布至全身，生物分布研究有助于探索mRNA 和 LNP（或脂质成分）在注射部位及全身组织器官的分布， 以及在这些组织中的存续时间，同时可为药理作用和毒理学 发现提供一定的信息。
（四）安全性※
1、相关动物种属选择 在研发中可根据 mRNA 疫苗特 性，选择对疫苗具有免疫应答并对 mRNA 效应敏感的动物种 属开展试验。
2、安全药理学 预防用 mRNA 疫苗在进入临床试验之前无 需开展单独的体内安全药理学试验。
3、一般毒理学试验 如果重 复给药毒性试验能够充分获得mRNA疫苗的急性毒性信息（如 首次给药后进行评估），通常可不开展单独的单次给药毒性 试验。应至少在1种相关动物中开展N+1次（N 为临床拟定给药次数）的重复给药毒性试验。评价指标中应纳入体液和/或细胞免疫应答的检测。
4、生殖毒性 用于新生儿、青春期前儿童或老年人群的 预防用mRNA疫苗，一般无需进行生殖毒性试验。动物 无法给予最大人用剂量时，可采用基于mg/kg计超过人用剂 量的给药剂量。若采用降低的剂量，应提供不能使用完整人 用剂量的合理性及依据。
5、遗传毒性 若 mRNA 疫苗中含有新脂质或新辅料，需开展遗传毒性 试验。
6、制剂安全性 mRNA 疫苗通常需开展过敏性试验。给药局部刺激性可在 重复给药毒性试验中伴随考察。
7、其他 通常不需开展致癌性试验。
（五）特殊考虑※
1、炎症反应 RNA 疫苗中的mRNA及LNP都可能影响并激活固有免疫系统， 应监测全身和局部的毒性及炎症反应。。递送系统中的其他辅助成分如PEG， 也可能影响疫苗理化性质，从而影响安全性。
2、修饰核苷的非预期及严重毒性反应 含有构象改变的非天然核苷 类似物，可引起线粒体毒性，导致肌病、多发性神经病、乳 酸酸中毒、肝脂肪变性、胰腺炎、脂肪营养不良甚至死亡， 然而非临床研究中未观察到这些人体中的毒性反应。若mRNA 疫苗中包含非天然修饰核苷，需在非临床研究中考虑评估以 上潜在毒性。
3、新脂质和新LNP 制备LNP的脂质可能影响颗粒的总电荷，当使用由新脂 质制成的LNP或LNP发生变更(如比例改变或工艺优化)，并 且这些LNP未进行过非临床和临床研究时，则需要评估含有 新脂质/新LNP的疫苗制剂的毒性。（1）在体外试验中评估新脂质的代谢特征，在疫苗制剂的体 内试验中评估新脂质的体内药代特征；（2）对于新脂质，参 考ICH S2（R1）开展遗传毒性试验；（3）在mRNA疫苗制剂 的一般毒理学和生殖毒性试验中对mRNA和新脂质/新LNP的 整体毒性进行评估等。
4、多价或联合mRNA疫苗 。针对多价或联合mRNA疫苗，应采用适当 的mRNA 剂量、比例和/或序列串联方式，使每种mRNA 的表 达量、表达效率及产生的免疫应答相互平衡。
四、平台技术加速研发的考虑※
平台技术 主要指使用相同的LNP（即相同的脂质组成、mRNA-脂质比例）， 且生产工艺未发生影响产品关键质量属性改变的情况。，非临床研究通常可适当 简化：1 仅同一种 病原体的靶抗原序列改变（如季节性或其他流行株已检测过 的流感病毒、新型冠状病毒刺突蛋白突变等）时，且每剂疫苗 的mRNA 和 LNP 总量等于或低于原有疫苗，且生产工艺未发 生影响产品关键质量属性改变的情况下， 2、若 拟开发疫苗的靶抗原改变 。 可能具有 交叉反应性、分子模拟、自身免疫反应、致敏性或免疫相关 的疾病增强作用等，则需开展毒理学试验以验证拟开发疫苗 是否存在上述风险。